發展多重即時及多重反轉錄即時基因定量技術偵測台灣淡水藍綠菌產毒及產臭功能性基因之研究(II)

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Title:	發展多重即時及多重反轉錄即時基因定量技術偵測台灣淡水藍綠菌產毒及產臭功能性基因之研究(II)
Authors:	顏宏愷;林財富
Keywords:	多重即時基因定量技術;多重反轉錄即時基因定量技術;藻類產毒功能性基因;藻類產臭功能性基因
Date:	2015
Issue Date:	2016-09-14T05:11:31Z (UTC)
Abstract:	水源水質的優養化常伴隨著藻類及藍綠細菌的增生，造成藻類毒素與臭味物質濃度的增加，進而影響水廠供水的品質與消費者用水的安全性，故準確、快速且實用之分子生物技術，具有高度之研究開發價值。多重即時及多重反轉錄即時基因定量聚合酶鏈鎖反應技術(multiplex qPCR、 multiplex RT-qPCR)具有快速、準確監測水環境微生物之優勢，但是在應用於藻類監測上，國際上則研究甚少、且尚缺乏水源實場監測應用。本研究已成功開發multiplex qPCR 及multiplex RT-qPCR 兩大系統偵測技術，並應用於環境水體中產毒及產臭藻類的監測，研究中依據先前調查資料，針對台灣水體常見產毒及產臭藻種之功能性基因片段進行特異性引子(primer)及專一性探針(probe)的設計並於實驗室中利用各單一藻株，完成各別引子及探針的驗證外，亦將多重引子及探針共同進行目標基因片段增幅及雜合的條件最適化，整合兩大系統同時監測 DNA(multiplex qPCR)與RNA(cDNA，multiplex RT-qPCR)，以推估藻類產毒及產臭潛勢及正在製造的量。由於兩大系統在同時四重探針的偵測下，不僅有效縮短針對目標官能性基因之分析時間，更因各目標官能性基因之RNA 監測，將預警的模式由被動地發現水中藻體數增加或藻類毒素或臭味物質濃度增加之被動方式，轉變為偵測正在發生或產生在藻體中藻類毒素或臭味物質之主動方式，藉由現地湖庫之環境監測初步結果顯示，multiplex RT-qPCR 系統所偵測到之目標官能性基因濃度與藻類毒素濃度及臭味物質濃度呈現良好的正相關性，達到快速、多目標且真實反應藻株產毒或產臭當下之真實狀況，完成了技術建置與技術現地應用、驗證之最終研究目的。
Relation:	行政院國家科學委員會補助專題研究計畫成果報告
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