探討本土性黑殭菌(Metarhizium anisopliae)、月橘（Murrayapaniculata L. Jack.）所含二次代謝物及其抗登革熱病毒之研究

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Title:	探討本土性黑殭菌(Metarhizium anisopliae)、月橘（Murrayapaniculata L. Jack.）所含二次代謝物及其抗登革熱病毒之研究
Authors:	林昀生;李景欽;劉上賓
Keywords:	登革熱;NS2B蛋白;黑殭菌素
Date:	2018-01-08
Issue Date:	2018-01-08T01:20:09Z (UTC)
Abstract:	2015年，根據衛福部疾管署統計，台灣南部地區感染登革熱人數約 4萬餘人，2百多人因此而死亡。目前在預防及治療登革熱策略上，除了2015年12月墨西哥與菲律賓核准上市四價登革熱疫苗 (Dengvaxia)之外，並無特殊藥物治療，因此從菌類的二次代謝物篩選天然先導物，以微生物可大量培養之優點，並結合藥理作用、結構修飾、化學合成、臨床試驗，未來或許有機會針對此進行產品開發。為了找尋和發展新藥，本研究中，我們以抑制NS2B蛋白為生物活性篩選導向，預試驗中發現分離自可可椰子紅胸葉蟲Coconut Leaf Beet le(Bront ispa longissimi )之蟲生真菌，黑殭菌M. anisopliae var. anisopliae (MA-126)以液態發酵和米粒太空包固態發酵之乙酸乙酯與酒精粗萃取物作測試，在兩者粗萃物濃度為 50μg/ml時，對NS2B蛋白分別具35%、10%的抑制率。進而以活性導向進行大量培養，從固態發酵中分離純化出Destruxin A、 Destruxin E；從控制於PH=4的液態發酵中分離純化出Destruxin A、Destruxin A2 。實驗中也發現控制於PH=12的液態發酵中，透過 NMR的檢測，未發現黑殭菌素(Destruxins)之成分。在活性試驗中，針對人類肝癌細胞株Huh-7，以登革熱第二型 (strain 16681) 病毒感染2 小時後移除病毒液，加入Destruxin A、Destruxin E、 Destruxin A2進行抗病毒測試，發現其抑制病毒的能力分別於 EC50=0.749 ± 0.014、0.764 ± 0.046、6.602 ± 1.263，在濃度為1 μΜ時，對輔因子蛋白NS2B分別具62 %、61%、34 %的抑制率。由於黑殭菌素的分子較大，在結構解析方面較為複雜，目前尚有4個未解析出的黑殭菌素，將繼續進行解析，並進而進行MTSassay kit測定各黑殭菌素之細胞毒性(CC50)、以即時定量反轉錄-聚合酶連鎖反應（Real time quantitative RT-PCR; RT-qPCR）及Western blotting分析病毒RNA 複製及蛋白產量，進而透過電腦軟體模擬有效成分之化學結構與大分子標靶蛋白進行分子對接(Molecular Docking Method)，以研究其交互作用。
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